薄层色谱法优缺点介绍以及薄层色谱法操作步骤

(1)定义薄层色谱，或称薄层层析，薄层层析是把支持物均匀涂布于支持板(常用玻璃板，也可用涤纶布等)上形成薄层，然后用相应的溶剂进行展开。从而对混合样品进行分离、鉴定和定量的一种层析分离技术。
　　(2)分类薄层层析可根据作为固定相的的支持物不同，分为薄层吸附层析(吸附剂)、薄层分配层析(纤维素)、薄层离子交换层析(离子交换剂)、薄层凝胶层析(分子筛凝胶)等。一般实验中应用较多的是以吸附剂为固定相的薄层吸附层析。
　　(3)方法的优缺点
　　①优点：操作方便、设备简单、显色容易等特点，同时展开速率快，一般仅需15～20min；混合物易分离，分辨力一般比以往的纸层析高10～100倍，它既适用于只有
　　0.01μg的样品分离，又能分离大于500mg的样品作制备用，而且还可以使用如浓硫酸、浓盐酸之类的腐蚀性显色剂。
　　②缺点：对生物高分子的分离效果不甚理想。
　　(3)操作步骤
　　①薄层板制备：除另有规定外，将1份固定相和3份水在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的气泡后，倒入涂布器中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布(厚度为
　　0.2～o.3mm)，取下涂好薄层的玻板，置水平台上于室温下晾干，后在110℃烘30min，即置有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均匀度(可通过透射光和反射光检视)。
　　②点样：除另有规定外，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边2.ocm，样点直径及点间距离同纸色谱法，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。
　　③展开：展开室如需预先用展开剂饱和，可在室中加入足够量的展开剂，并在壁上贴二条与室一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封室顶的盖，使系统平衡或按正文规定操作。将点好样品的薄层板放入展开室的展开剂中，浸入展开剂的深度为距薄层板底边0.5～1.ocm(切勿将样点浸入展开剂中)，密封室盖，待展开至规定距离(一般为10-15cm)，取出薄层板，晾干，按各品种项下的规定检测。
　　④显色：取出的薄层板，立即喷洒显色剂，使其显色，计算rf值或使之出现各种有色的斑点，与标准进行对照比较，可确定其成分。

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