人肾足细胞

human podocyte人肾足细胞特性：
1）来源：human podocyte人肾足细胞
2）含量：>1x106 个/ml
3）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
4）规格：t25瓶或者1ml冻存管包装
5）培养基：90%mccoy's 5a +10%fbs
6）生长特性：贴壁生长运输和保存：使用含有优质胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞。收到细胞后，可在1000rpm，常温条件下，离心5min后，于洁净操作台弃去上清，加入推荐使用的培养基后转移至10cm培养皿或者t25培养瓶中培养，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
细胞用途：仅供科研使用。
human podocyte人肾足细胞培养步骤
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备基础培养基( gibco，，添加nahco3 1.5g/l，丙酮酸钠 0.11g/l)；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%完全培养基，10%dmso，现用现配。液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1ml细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4ml培养基混合均匀。在1000rpm条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2ml培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2） human podocyte人肾足细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的pbs润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%trypsin-0.53mm edta）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000rpm条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2ml培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%dmso后进行冻存。
human podocyte人肾足细胞注意事项：
1.收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2.先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置数小时（4h左右），稳定细胞状态，切忌在温箱内静置过夜。
3.静置后镜检，拍照，记录细胞状态。建议传代后也拍照记录细胞生长情况。
4. 悬浮细胞：将细胞瓶内液体都转移至无菌离心管内，1000 转/分钟离心5min，培养基上清可备用，管底细胞沉淀用培养基重悬。镜检时若细胞密度超过80%，可将细胞悬液分至2个细胞瓶内培养；若密度未超过80%，细胞悬液移至原瓶继续培养，待达到80%时再正常传代。
备注：聚团生长慢，有密度依赖，必须使用t25培养瓶竖立培养，3天一次半量换液一次，1-2周传代一次。
贴壁细胞：若细胞密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，收集细胞瓶内的培养基，留8ml继续培养至80%左右再传代，瓶盖可稍微拧松。
备注：细胞贴壁慢，传代后细胞放2天不动。
5.细胞瓶内的培养基含血清和双抗，可收集后4℃保存备用，可补加2%血清。刚开始传代时建议一半用细胞瓶内的培养基，一半用客户自备的培养基，使细胞逐渐适应培养条件，以免因不适应而造成生长状态不佳。

北京华工科创生物技术有限公司

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