小鼠低密度脂蛋白（LDL）ELISA试剂盒使用说明书
小鼠低密度脂蛋白(ldl)elisa试剂盒使用说明书
本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆及相关液体样本中小鼠低密度脂蛋白(ldl)含量。
实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠低密度脂蛋白(ldl)水平。用纯化的小鼠低密度脂蛋白(ldl)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入低密度脂蛋白(ldl)，再与hrp标记的低密度脂蛋白(ldl)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物tmb显色。tmb在hrp酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的低密度脂蛋白(ldl)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（od值），通过标准曲线计算样品中小鼠低密度脂蛋白(ldl)浓度。
试剂盒组成：
试剂盒组成
48孔配置
96孔配置
保存
说明书
1份
1份
封板膜
2片（48）
2片（96）
密封袋
1个
1个
酶标包被板
1×48
1×96
2-8℃保存
标准品：180μmol/l
0.5ml×1瓶
0.5ml×1瓶
2-8℃保存
标准品稀释液
1.5ml×1瓶
1.5ml×1瓶
2-8℃保存
酶标试剂
3ml×1瓶
6ml×1瓶
2-8℃保存
样品稀释液
3ml×1瓶
6ml×1瓶
2-8℃保存
显色剂a液
3ml×1瓶
6ml×1瓶
2-8℃保存
显色剂b液
3ml×1瓶
6ml×1瓶
2-8℃保存
终止液
3ml×1瓶
6ml×1瓶
2-8℃保存
浓缩洗涤液
（20ml×20倍）×1瓶
（20ml×30倍）×1瓶
2-8℃保存
样本处理及要求：
血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。血浆：应根据标本的要求选择edta、者柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用pbs（ph7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的pbs，ph7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的pbs（ph7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。操作步骤
标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为120μmol/l,80μmol/l,40μmol/l,20μmol/l,10μmol/l）。加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。配液：将30（48t的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48t的20倍）倍稀释后备用。洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。温育：操作同3。洗涤：操作同5。显色：每孔先加入显色剂a50μl，再加入显色剂b50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（od值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。注意事项：
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间建议控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。请每次测定的同时做标准曲线，建议做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本od值大于标准品孔第一孔的od值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。底物请避光保存。严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。本试剂不同批号组分不得混用。如与英文说明书有异，以英文说明书为准。计算：
以标准物的浓度为横坐标，od值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的od值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与od值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的od值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
（此图仅供参考）
试剂盒性能：
样品线性回归与预期浓度相关系数r值为0.95以上。批内与批见应分别小于9%和11%检测范围：
5μmol/l-150μmol/l
保存条件及有效期：
试剂盒保存：2-8℃。有效期：6个月
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本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆及相关液体样本中小鼠低密度脂蛋白(ldl)含量。
实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠低密度脂蛋白(ldl)水平。用纯化的小鼠低密度脂蛋白(ldl)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入低密度脂蛋白(ldl)，再与hrp标记的低密度脂蛋白(ldl)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物tmb显色。tmb在hrp酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的低密度脂蛋白(ldl)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（od值），通过标准曲线计算样品中小鼠低密度脂蛋白(ldl)浓度。
试剂盒组成：
试剂盒组成
48孔配置
96孔配置
保存
说明书
1份
1份
封板膜
2片（48）
2片（96）
密封袋
1个
1个
酶标包被板
1×48
1×96
2-8℃保存
标准品：180μmol/l
0.5ml×1瓶
0.5ml×1瓶
2-8℃保存
标准品稀释液
1.5ml×1瓶
1.5ml×1瓶
2-8℃保存
酶标试剂
3ml×1瓶
6ml×1瓶
2-8℃保存
样品稀释液
3ml×1瓶
6ml×1瓶
2-8℃保存
显色剂a液
3ml×1瓶
6ml×1瓶
2-8℃保存
显色剂b液
3ml×1瓶
6ml×1瓶
2-8℃保存
终止液
3ml×1瓶
6ml×1瓶
2-8℃保存
浓缩洗涤液
（20ml×20倍）×1瓶
（20ml×30倍）×1瓶
2-8℃保存
样本处理及要求：
血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。血浆：应根据标本的要求选择edta、者柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用pbs（ph7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的pbs，ph7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的pbs（ph7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。操作步骤
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试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间建议控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。请每次测定的同时做标准曲线，建议做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本od值大于标准品孔第一孔的od值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。底物请避光保存。严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。本试剂不同批号组分不得混用。如与英文说明书有异，以英文说明书为准。计算：
以标准物的浓度为横坐标，od值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的od值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与od值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的od值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
（此图仅供参考）
试剂盒性能：
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保存条件及有效期：
试剂盒保存：2-8℃。有效期：6个月
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