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1. 鉴于生物学方法的双重间接性，明确检测的目标分子，设置多个阳性对照组和阴性对照组，理清信号值和检测目标分子的线性联系；
2. 建立test system，通过配体受体的结合实验，寻找合适的配体受体相对浓度以得到样品对test system的敏感性；
3. 加入梯度稀释的样品进入test system，绘制样品相对于test system的剂量全曲线；
4. 以实验目的为导向，分别对亲和力大小比较为目的和大分子定量为目的进行差异的浓度点选择，并通过合规的方法学评价程序对方法的质量进行初步的评价。
elisa直接法和elisa竞争法有相同的方法学质量评价程序和标准，即亲和力大小比较的方法学质量评价程序和标准usp1032,1033,1034；定量分析的方法学质量评价程序和标准2015版中国药典第三部9012 生物样品定量分析方法验证指导原则或者美国fda最xin版本的guidance for industry bioanalytical method validation。elisa竞争法在相同的实验条件下对于对照品浓度点的微调可以完成亲和力大小比较和大分子定量两方面应用，这个有别于笔者之前的文章elisa技术应用概览和方法学开发初析对于elisa直接法两方面不同应用不同的实验条件，但是两类方法的四种应用均能够通过验证符合标准要求，只能说实践出真知，不管白猫黑猫，能抓住老鼠的就是好猫了。
在体外所有的体外功能学实验中，样品引起检测体系的变化，并以信号的形式展示出来，这个应该是体外生物学实验方法最通用的原则，有结合才会有功能，功能是对药物引起的变化（响应标志物）的准确定量。理解elisa实验关于结合和定量的应用以及方法质量评估标准对于所有的功能学实验的开发和评价都有着十分重要的借鉴意义，elisa里面有乾坤。
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